预防新生儿GBS感染 早期筛查很重要
2013-04-28 20:39:04   来源:37度医学网   作者:  评论:0 点击:

预防新生儿GBS感染
 

  B族链球菌(GBS),亦称无乳链球菌,定植于健康人群的下消化道与泌尿生殖道,健康人群的携带率与种族区域有关,欧美国家携带率为8%~35%,明显高于亚洲。20世纪70年代以来,GBS引起新生儿感染广受重视。

  近年来,欧美国家强化预防,新生儿GBS感染得到有效控制,但在免疫功能低下人群或老年人群的严重感染呈上升趋势。在我国,孕产妇人群常规筛查GBS并未普及,国内相关研究资料较少。下文主要介绍实验室筛查技术和预防控制措施。

  GBS感染的流行

  GBS为围产期新生儿重要的致病菌之一。经阴道分娩的新生儿,如母体生殖道或直肠携带GBS,在分娩过程中,80%新生儿可携带该菌。GBS可引起严重新生儿感染,如脑膜炎、脓毒症、新生儿肺炎等疾病,其死亡率高达50%,特别是在早产儿或低体重儿中,感染率与死亡率更为突出。目前,欧美等发达国家推荐对妊娠妇女是否携带GBS进行产前筛查。美国疾病预防控制中心于2010年推出的GBS防治指南中明确提出,应对35~37孕周的妇女进行阴道-直肠GBS定植筛查。

  GBS引起新生儿感染分为两类:早发型感染(EOD)与晚发型感染(LOD)。EOD发生于新生儿出生1周内,而LOD发生于出生后第7天至3个月内。EOD的发病率为(1~4)/1000,死亡率为15%,而低体重儿的死亡率可高达30%~50%。上世纪80年代中期以来,大量临床研究表明,对携带GBS的孕产妇在分娩期间进行抗生素预防,可有效阻断新生儿的GBS感染(主要是EOD,但对LOD发病率无明显影响)。

  孕产妇B族链球菌实验室筛查

  样本采集方式

  在孕期35~37周孕妇的阴道下端与直肠(通过肛门括约肌)进行拭子采集,可提高GBS筛选的阳性率。

  采集的样本应放入专门的转运管中,在培养前置于4℃条件下,并于24小时内进行增菌。

  若不能及时处理,采集后的拭子在转运肉汤(多直接选用选择性增菌肉汤)中,室温下可存活数日,但检出率随着时间延长下降。若放于高温条件下,检出率将受到严重影响。

  样本处理

  无论采用何种方法鉴定GBS,采集后的样本均应放入选择性增菌肉汤内增菌,可显著提高GBS的检出率。若采集样本直接涂布于哥伦比亚血平皿上,检出率仅为增菌后的50%。

  选择性增菌肉汤以Todd-Hewitt(THB)为代表。培养肉汤加有萘啶酸(15 μg/ml)与庆大霉素(8 μg/ml)或萘啶酸(15 μg/ml)与多黏菌素(10 μg/ml)。

  将有采集样本的THB放入36℃,5%CO2的条件下孵育24小时,若发现肉汤有浑浊,可涂布于血平皿上放回CO2孵箱生长,若未见浑浊,可将THB继续孵育24小时,再涂于血平皿(见图1)。

  GBS鉴定

  GBS增菌后可在血平皿上良好生长,根据菌落形态、革兰染色(阳性球菌)、触酶试验(阴性)等初步判断。可采用乳胶凝集法直接检测链球菌兰斯非尔德(lancefield)抗原,亦可采用生化鉴定。GBS鉴定方法如下。

  1. cAMP 试验 GBS可产生环磷酸腺苷(cAMP)因子,此物质促进葡萄球菌β-溶血素的活性。因此,可在两种细菌的交界处溶血力增强,出现箭头型透明溶血区。在羊血琼脂平板上先将β-溶血的金黄色葡萄球菌划一横线接种。再将待检菌与其垂直接种,两者应相距1cm,于35℃孵育18~24小时,GBS菌落出现阳性反应(见图2)。

  2. 显色培养肉汤 在选择性增菌肉汤内添加显色底物,若有GBS生长,则肉汤显色(如Carrot肉汤可显桔红色),有助于快速发现GBS,特异性可达100%,是一种省时省力又快速的检测方法,但是该方法有4%的非溶血性GBS菌株呈假阴性。

  3. 显色培养基 GBS在格拉纳德(Granada)培养基上呈现橙色类胡萝卜素色(granadaene),色素的产生与GBS的β-溶血有关,利用这一原理可进行GBS筛选。显色培养基颜色分明,易于判别,但有5%~8%的GBS菌株(非β-溶血GBS)并不产生该色素,因此注意筛查过程中漏诊的GBS(图3)。

  4. 核酸检测 目前,GBS筛查采用常规培养方法,存在局限性,如耗时长,培养法一般需要24~72小时。对于未常规进行孕期检查,未按要求在35~37周进行GBS筛查,因临产入院的患者,需要迅速得到结果,聚合酶链反应(PCR)检测更有利。PCR针对GBS特有核酸序列,如cAMP因子相关的cfb基因,可在2~3个小时内得到结果。而实时PCR,不仅大大提高了筛查的灵敏度,同时可进行GBS定植量判断,试验可在30~60分钟完成。

  预防与治疗

  1.对 GBS阳性的孕产妇,临产前首选青霉素或氨苄西林。对有过敏史,但程度较轻 (无过敏性反应、血管神经性水肿、呼吸窘迫、荨麻疹等体征或症状),可选用头孢唑啉;如过敏严重,且红霉素或克林霉素敏感,可选用此两种抗生素,如耐药,则选用万古霉素。

  2. 对携带GBS的妊娠妇女,通过产道分娩,新生儿可能定植,可引起新生儿感染。对剖宫产,母婴GBS垂直传播的可能性依然存在,即使在胎膜完好的情况下,下生殖道定植的GBS可上行传播进入宫内感染婴儿,因此,剖宫产的孕妇也应预防GBS新生儿感染。

  3. 除了药物预防之外,目前发达国家也在积极开展疫苗免疫预防的研究工作,但目前多停留在动物试验阶段,未来可能是GBS预防的解决方式。多价GBS疫苗的制备必须依据本地区人群的血清型分布,因此了解不同区域的GBS血清型具有重要意义。

  4. 新生儿GBS感染首选青霉素,严重感染者可加用庆大霉素。此外,可选用万古霉素与克林霉素,但国内GBS对克林霉素的耐药率较高。

  总之,GBS是严重威胁母婴安全的常见致病菌,对于妊娠妇女在孕周35~37周时进行阴道和(或)直肠筛查十分重要,欧美发达国家已广泛开展,并取得良好效果。国外的先进经验为我们提供了良好的借鉴,对我国适宜人群的GBS携带筛查、cps血清型分布、多位点序列分型与国际间的比较是重要的研究课题。

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